細胞的體外培養技術,是細胞生物學的一項基本實驗。了解細胞培養的目的、實驗材料、實驗步驟等知識,有利于培養出更健康的細胞,更好地應用于科學實驗中。
本期內容,我們來探討細胞培養過程中,常見的液體試劑。
培養基是細胞賴以生存的液體環境的提供者,人工模擬細胞在體內生長的營養環境,為細胞營養、促進細胞生長增殖的物質基礎。
基礎培養基是水、無機鹽、碳水化合物、維生素、氨基酸等成分的混合溶液。一般情況下,會通過補加血清或是各類不同等成分,配制為適合不同細胞生長繁殖的培養基。實驗中,可以通過ATCC查詢所培養的細胞適合什么類型的培養基,配制比例是多少。
培養基可以是粉劑或液體,英文均為medium。
培養基有助于保持培養體系中的pH值和滲透壓平衡,是控適宜細胞生長的重要且復雜的因素。
對于一些培養難度較大的細胞,選擇一款能夠與細胞“契合"的培養基,有利于維持細胞實驗結果的穩定。另外,培養基使用的便捷程度,也是不可忽視的一個方面。
Ausbian干細胞培養基,是在含微量胎牛血清的基礎培養基中,通過添加一種人永生化干細胞系的條件培養基混合組成,是一款即用型培養基。解凍后即可參與干細胞培養,無需二次配制,方便快捷且高效。
根據供體動物或采血時間的差異,血清分為許多種類。用于動物細胞培養的血清主要有牛血清、馬血清、豬血清等。其中,牛血清的使用更為廣泛,胎牛血清憑借其豐富的營養,支持多種細胞生長繁殖的特性,深受科研人員喜愛。
合格的胎牛血清,應采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血,內毒素含量也應嚴格控制,過高的內毒素會導致細胞提前衰老、凋亡,細胞狀態變差,相應的實驗結果也容易產生波動。
Ausbian進口特級胎牛血清,采自5-8月齡牛胚胎,澳洲血源,出廠前均經過嚴格質控,并附詳細《檢測報告》,內毒素含量≤3EU/ml,盡可能降低內毒素對細胞的影響,為細胞創造一個健康的生長環境,有利于實驗的穩定。
在無菌的理想狀態下,是沒有必要添加抗生素的。但由于實驗環境在實際中沒要辦法做到真正的無菌,所以很多科研人員會“習慣性、預防性"地添加抗生素。
但事實上,抗生素并不是「免死金牌」,真菌、支原體這些污染是它不能夠對抗的,甚至濫用還會適得其反。
一些文獻中表明:β-內酰胺類抗生素及氨基糖甙類抗生素,對真核細胞培養有抑制增殖作用,在原代細胞和干細胞等難養細胞上尤其明顯。有研究人員發現,抗生素(雙抗:青霉素和鏈霉素)的使用影響人體肝細胞中基因表達與基因調控。
雖然抗生素對真核細胞生長的影響機制至今尚未明確,但是為了細胞更好的生長,實驗結果更加準確和穩定,在實驗過程中盡量不要隨意使用。實驗室的環境衛生需要精心維護。
定期清潔、規范操作都是盡量避免實驗污染的好方法。德國MB公司的支原體污染祛除試劑
細胞培養中,還可能會用到一些其他液體試劑。
比如用于細胞消化的胰酶,也叫細胞消化液體。常用的胰酶溶液是0.25% 、0.125%的胰蛋白酶與0.02%的二乙胺四乙酸二鈉(EDTA) 調配的溶液。該消化液可以使細胞脫離粘附表面,形成單個細胞。
酚紅指示劑,一種用于指示pH溶液,中性為紅色,酸性為黃色,堿性為紫色。但并不是所有培養基都要添加酚紅,應根據細胞種類、實驗目的再決定
HEPES,細胞培養中很常見的一種Buffer;谷氨酰胺,可以作為細胞的能量來源,參與蛋白質的合成和能量代謝。但谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應在-20 ℃冰凍保存,添加到液體培養基后,在4℃保存,不要超過1周。