支原體祛除

在某些細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過程中，所培養(yǎng)的細(xì)胞十分珍貴：要么是大面積擴(kuò)增的細(xì)胞，一旦丟掉將前功盡棄從0開始；要么是細(xì)胞株本身就很稀有，不能丟棄。在這些情況下，一旦細(xì)胞發(fā)生支原體污染，很容易讓沒有經(jīng)驗(yàn)的小伙伴門焦頭爛額、無從下手。市面上琳瑯滿目的支原體祛除試劑，到底該怎樣選擇？

今天我們就“如何選擇細(xì)胞支原體祛除試劑"這一問題，給出相應(yīng)的建議，希望對(duì)大家有所幫助！

一、品牌選擇

盡量選擇有較多成功案例、在市場(chǎng)上有一定zhi名度、客戶群體廣泛，且售后有保障的的品牌。

德國Minerva Biolabs，簡(jiǎn)稱MB，就是這樣一個(gè)備受信賴的品牌。

該公司成立于1999年，專注于支原體檢測(cè)與祛除，其產(chǎn)品有效診斷和消除細(xì)胞培養(yǎng)物和生物制藥中的支原體污染，廣受國內(nèi)外科研用戶贊譽(yù)。

二、產(chǎn)品選擇

德國MB有3種支原體祛除劑，均可用于細(xì)胞中支原體的祛除，但在使用方法和使用效果上略有不同。

Zell Shield®

復(fù)合抗生素成分，抑制支原體蛋白和DNA合成，也抑制細(xì)菌和真菌。

適合細(xì)胞已發(fā)生支原體污染，但又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)：如已轉(zhuǎn)染或大量擴(kuò)增的細(xì)胞的情況。

使用時(shí)需要采用懸浮沖洗法，并連續(xù)培養(yǎng)三代，關(guān)于懸浮沖洗法，往期文章中也有詳細(xì)介紹：

如何祛除「普通細(xì)胞」的支原體污染？

消化細(xì)胞

?

離心

?

棄上清

?

PBS清洗細(xì)胞

?

低速離心棄上清

重復(fù)清洗3次

?

加入含有Zell Shield®的

新鮮培養(yǎng)基

Mynox®

對(duì)于無法長(zhǎng)期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收貨液，則推薦使用德國MB公司的Mynox® ，處理3小時(shí)，直接殺除。關(guān)于Mynox®的產(chǎn)品特點(diǎn)往期文章也有介紹：

「珍貴細(xì)胞」遭遇支原體污染，揭秘拯救全過程

使用方法：

（1）細(xì)胞重新傳代時(shí)，用含Mynox®、5%FBS的的培養(yǎng)基替換原有培養(yǎng)基，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)

（2）孵育培養(yǎng)2-3小時(shí)

（3）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液

（4）用不含Mynox®的正常培養(yǎng)基（原始培養(yǎng)條件）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，傳代3-4次

（5）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體檢測(cè)

Mynox® Gold

若是可以培養(yǎng)超過一個(gè)月的細(xì)胞，則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold，直接殺除+鞏固防護(hù)兩步處理，祛除支原體的同時(shí)，可進(jìn)一步在后續(xù)培養(yǎng)中鞏固清除效果，防止支原體“卷土重來"。Mynox®Gold的產(chǎn)品特點(diǎn)往期文章也有介紹：

「珍貴細(xì)胞」遭遇支原體污染，揭秘拯救全過程

使用方法：

（1）治療液與含5%FBS的培養(yǎng)及混合

（2）將混合后的治療液添加至培養(yǎng)皿中

（3）將接種細(xì)胞

（4）培養(yǎng)細(xì)胞至80%-90%匯合后，進(jìn)行傳代

（5）傳代的同時(shí)加入鞏固液

重復(fù)（4）（5）兩次

（6）再無Mynox® Gold的情況下傳代

（7）用Venor® Gem支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)