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常規細胞實驗大匯總~細胞凋亡實驗

更新時間:2022-04-28  |  點擊率:688

在很多課題中,細胞實驗都是*的。除了之前我們介紹的細胞復蘇、傳代和凍存這“基礎三件套"之外,還有許多常見的操作,需要我們了解甚至是熟練掌握。


磷脂酰絲氨酸外翻分析:又叫做Annexin V法,常用來檢測細胞凋亡。

檢測原理:

磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于細胞膜的內側,但在細胞凋亡的早期,PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與PS高親和力特異性結合。將Annexin-V進行熒光素(FITC、PE)或biotin標記,以標記了的Annexin-V作為熒光探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區分開來。


用途:用于區分早期凋亡的細胞與晚期凋亡加壞死的細胞。適合懸浮培養的細胞。


特點:某些細胞的細胞膜外表面帶有大量的PS,因而也不能使用該方法(比如巨核細胞、血小板、某些骨髓系細胞);靈敏度高、方便快捷;只適用于活細胞,不能用能破壞細胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。

磷脂酰絲氨酸外翻分析


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