支原體污染不僅是細胞培養中需要克服的現象,而且是制藥、生物制品生產中需要加以避免的。
圖:電鏡下的支原體
對于藥品和生物制品,出廠前基本都需要做支原體檢驗。在這方面,《中國藥典》有詳細的規定。有些獸用疫苗出廠前也需要做支原體檢驗,可參考《中國獸藥典》。
對于細胞培養的實驗室,建議應定期進行支原體污染存在與否的常規監測。原因有四:
1、支原體污染肉眼不易分辨。支原體只有電鏡下才能觀察到,早期的支原體感染沒有很明顯的特征。
2、細胞極易發生支原體污染。據對多個研究機構的實驗室調查顯示,細胞培養時,支原體污染的發生率平均在60%以上。常規抗生素無法抑制支原體。支原體可來自環境、人的口腔、鼻咽、胰酶或者培養基。細胞間內有一瓶細胞污染,其支原體極易通過氣溶膠造成傳播。
3、支原體對實驗干擾大。支原體可造成細胞的染色體斷裂和蛋白表達譜變化,爭奪細胞的營養,使實驗數據的可信度下降。
4、支原體檢測較為方便。現在吸取200ml細胞培養上清,采用PCR的方法,只需不到3個小時即可出結果。
建議選用特異性強、靈敏度高、檢測支原體種類較多、省時省力的PCR試劑盒,比如德國Minerva公司出品、羅伯特·科赫研究所監制的,其有檢測試劑盒共有四款(其中一款為熒光定量法)可加以選用,其中兩款適合工業用戶,已通過歐洲藥典認證。其支原體檢測的配套產品也很豐富,例如支原體DNA提取試劑盒(非必選),支原體標準品等,
也許有人會說,我培養的細胞一直都長的很好,形態正常,或者說,我已經用了預防支原體的產品,我不需要作支原體檢測。但如果細胞長得不好,也沒有用支原體預防劑或者有如下情況時,則強烈建議進行支原體檢測。
1、實驗室里帶進來新細胞。新細胞是支原體污染的主要來源。在新細胞作任何用途之前,有必要隔離細胞,并檢查是否有支原體污染。
2、實驗室里近發生過支原體污染。
3、細胞將要凍存之前,建議進行支原體檢測。因為支原體的存在,會導致液氮罐中支原體污染的傳播。